Начало > Новини > Съдържание

Какъв е дизайнът на PCR лабораторията

Aug 03, 2020

Ядрото на PCR лабораторния дизайн:


1, PCR лабораторна схема

PCR амплификационната лаборатория е разделена на три отделни работни зони по принцип: зона за съхранение и подготовка на реагента, зона за подготовка на проби, зона за анализ на амплификация и амплификация. За да се избегне кръстосано замърсяване, навлизането във всяка работна зона трябва стриктно да следва една посока, тоест само от зоната за съхранение и подготовка на реагента → зоната за приготвяне на образци → зоната за анализ на продукта за усилване и усилване. Прехвърлянето на реагенти и проби между всяка експериментална зона трябва да се извърши през прозореца за трансфер.



2. Проектиране на лабораторна климатична и вентилационна система и контрол на налягането

PCR лабораторията няма строги изисквания за ниво на пречистване, но за да се избегне възможността от кръстосано замърсяване между различни експериментални зони, препоръчително е да се приеме форма за пълна доставка и пълна форма на организация на отработения въздух. В същото време съотношението на подаване и изпускане на въздух трябва да бъде строго контролирано, за да се осигурят изискванията за налягане във всяка експериментална зона.


微信图片_20200701162204

(1) Зона за съхранение и подготовка на реагенти

Основните операции в тази експериментална област са приготвянето на реагенти за съхранение, разпределението на реагентите и приготвянето на основната реакционна смес. Реактивите и материалите, използвани за приготвяне на проби, трябва да се транспортират директно до тази зона, а не през други зони. Суровините от реагентите трябва да се съхраняват в тази зона и да се приготвят в необходимите съхранетелни реагенти в тази зона. За контрол на налягането на въздушния поток тази зона трябва да поддържа леко положително налягане отвън.



(2) Зона за подготовка на образци

Основните операции в тази област са консервиране на проби, екстракция на нуклеинова киселина (РНК, ДНК), съхранение и добавяне в реакционната тръба за амплификация и измерване на синтеза на ДНК. Градиентът на налягането в тази област се изисква да бъде положително налягане спрямо съседната зона, за да се избегне замърсяване на аерозола в зоната от съседната зона. Освен това, тъй като по време на операции по зареждане на проби може да се получи замърсяване, причинено от аерозоли, трябва да се избягва ненужното ходене в тази зона.


(3) Област за анализ на усилване и усилване на продукта

Основните операции в тази област са амплификация на ДНК и определяне на амплифицирани фрагменти. В допълнение, добавянето на подготвения ДНК шаблон (от зоната за подготовка на пробата) и приготвянето на основната реакционна смес (от зоната за съхранение и приготвяне на реагента) в реакционна смес също може да се извърши в тази област. Изискванията за градиент на налягането в тази област са: отрицателно налягане спрямо съседната зона, за да се избегне изтичане на аерозол от тази зона. За да се избегне замърсяване, причинено от аерозоли, ненужното ходене в района трябва да бъде сведено до минимум. Отделни операции като добавяне на проби трябва да се извършват в ултра чиста пейка.


3. Предотвратяване и контрол на замърсяването


Основният проблем на PCR лабораторния дизайн е как да се избегне замърсяване. В действителната работа са често срещани следните видове замърсяване: замърсяване на усилени продукти; замърсяване на естествената геномна ДНК; замърсяване на реагенти и замърсяване между образци. Тъй като веднъж възникне замърсяване, експериментът трябва да бъде спрян, докато се открие източникът на замърсяването, а резултатът от експеримента трябва да бъде обезсилен и експериментът трябва да бъде повторен. Следователно, отнема време и досадно да се намери източникът на замърсяване около лабораторията след настъпването на замърсяването и отпадъците от човешка сила и материални ресурси. Следователно, за да се избегне замърсяването, първият приоритет трябва да бъде предотвратяването, а не елиминирането.


(1) Строго разделение на работната зона

Настройката на всяка експериментална област е разумна; всяка експериментална зона трябва да има очевидна маркировка (като привличащ вниманието номер на къщата или различен цвят на земята и т.н.), за да се избегне объркване на оборудването и реагентите в различни експериментални зони.


(2) Разумни настройки на системата

Разумни настройки на климатичната и вентилационната система, опитайте се да използвате пълна доставка и пълна климатична система за отработени газове; строг контрол на налягането на въздушния поток, за да се осигурят различни изисквания за налягане в различни експериментални области.


(3) Стандартна работа

Техниците от лабораторията за тестване на амплификацията трябва да преминат обучение на работното място и едва след като бъдат квалифицирани, могат да бъдат ангажирани с клинични тестове за амплификация на ген; по време на експерименталната операция операторът трябва да носи ръкавици и да ги сменя често. Освен това използването на капачки за еднократна употреба при операцията също е ефективна мярка за предотвратяване на замърсяването; работата по почистването е навременна и правилна. След приключване на експерименталната работа, зоната трябва да се почисти незабавно. В допълнение към конвенционалната дезинфекционна течност за изтриване и дезинфекция на повърхността или дезинфекция с ултравиолетова светлина, някои експериментални съоръжения също трябва да бъдат автоклавирани.


(4) Строго управление

Строго контролирайте персонала, влизащ и излизащ от лабораторията. Персоналът, който няма нищо общо с експеримента, няма право да влезе и да напусне лабораторията по желание. Ако е възможно, настройте независими проходи и врати, които да влизат и излизат от цялата експериментална зона; минимизиране на ненужното ходене в експерименталната зона, за да се намали възможността от кръстосано замърсяване; продукти за амплификация Площта за анализ е основният източник на замърсяване на амплифицираните продукти. Отпадъчната течност не може да се изхвърля в лабораторията. Трябва да се накисне и дезинфекцира в дезинфектант и да се изхвърли далеч от лабораторията. Материалите за еднократна употреба като използваните накрайници също трябва да бъдат дезинфекцирани. След накисване и дезинфекция, равномерно третиране, като изгаряне и др .; зоната за анализ на амплифицирания продукт може да използва някои генетични мутации и токсични вещества и трябва да се обърне специално внимание на защитата на безопасността на експерименталния персонал.


(5) Пълна лабораторна помощна база

Необходими са пълни лабораторни съоръжения за осигуряване на експерименталната работа. Съответното оборудване и инструменти трябва да бъдат оборудвани според различните експериментални съдържания на всяка лаборатория, като ултрачисти пейки, центрофуги, проби и др.