Начало > Новини > Съдържание

Цялостно планиране на лабораторията за пречистване на PCR

Jul 22, 2020

За да се предотврати кръстосано замърсяване по време на работа, основните изисквания за неговото проектиране, изграждане и управление на експлоатацията са:


1. Проектиране и изграждане на лаборатория, безопасна работна система или стандартни експлоатационни процедури за безопасност трябва да отговарят на изискванията на действащия&"Общи изисквания за лабораторна биобезопасност GG"; GB19489.


2. PCR се разделя на четири функционални области според работните стъпки, а именно: зона за съхранение и подготовка на реагентите, зона за подготовка на пробата, зона за амплификация и зона за анализ на амплификационен продукт. Ако е оборудван флуоресцентен инструмент за рентгеново изследване в реално време, областите за усилване и анализ на продукта могат да бъдат комбинирани. Всяка функционална област трябва да бъде ясно маркирана, а оборудването и предметите в различни функционални зони не трябва да се смесват.


Посоката на въздушния поток на PCR лабораторията може да се извърши в съответствие с зоната за съхранение и подготовка на реагента → зона за подготовка на пробата → зона на усилване → разширена зона за анализ на продукта, за да се предотврати навлизането на усилените продукти в предварително усилената зона заедно с въздушния поток. Може да се извърши по начин за намаляване на налягането на въздуха от зоната за съхранение и подготовка на реагента → зона за приготвяне на образец → зона на амплификация → зона за анализ на усилвателния продукт. Това може да бъде постигнато чрез инсталиране на вентилатори за отработени газове, устройства за изпускане под налягане или други приложими методи.


3. При влизане във всяка работна зона трябва стриктно да следва една посока, тоест зона за съхранение и подготовка на реагенти → зона за подготовка на образец → зона за усилване → зона за анализ на амплификационния продукт. Трябва да се използват различни работни зони (например различни цветове). Работниците не трябва да свалят работно облекло, когато напускат всяка работна зона.


4. Почистването на лабораторията трябва да се извърши по посока на зоната за съхранение и подготовка на реагента → зона за подготовка на образец → зона на амплификация → разширена зона за анализ на продукта. Различните експериментални зони трябва да имат свои собствени уреди за почистване, за да се предотврати кръстосано замърсяване.


5. След приключване на работата работната зона трябва да се почисти незабавно. Повърхността на лабораторната пейка в работната зона трябва да може да издържа на дезинфекцията и почистващите ефекти на химикали като натриев хипохлорит. Ултравиолетовото облъчване на повърхността на лабораторната скамейка трябва да бъде удобно и ефективно. Тъй като разстоянието и енергията на ултравиолетовото облъчване са много критични за ефекта на обеззаразяване, може да се използва подвижна ултравиолетова лампа (дължина на вълната 254 nm) и след приключване на работата, тя може да бъде настроена да излъчва в рамките на 60-90cm на експерименталната маса , Тъй като амплифицираният продукт е само няколко стотин или десетки основни двойки (bp), той не е чувствителен към UV увреждане, така че UV-облъченият усилен фрагмент трябва да бъде облъчен за по-дълго време, за предпочитане за една нощ.


4470e46a8191b41672af5226018ca72f



Функциите на зоната за съхранение и подготовка на реагентите са: приготвяне на реагенти за съхранение, разпределяне на реагенти и приготвяне на реакционната смес за усилване, както и съхранението и приготвянето на консумативи като центрофужни тръби и накрайници. Материали като складови реагенти и консумативи, използвани за приготвяне на проби, трябва да бъдат директно транспортирани до зоната за съхранение и подготовка на реагентите и не могат да преминават през зоната за откриване на усилване. Положителните контролни материали и материалите за контрол на качеството в комплекта не трябва да се съхраняват в тази зона, а трябва да се съхраняват в тази област. Зона за обработка на образци.


Функцията на зоната за подготовка на пробата е: извличане, съхранение и добавяне в реакционната тръба за амплификация на нуклеинова киселина (РНК, ДНК). За операции, включващи клинични проби, трябва да се спазват изискванията за защитна екипировка, лична защита и експлоатационни спецификации за вторични лаборатории по биобезопасност. Тъй като по време на смесването на пробите и пречистването на нуклеинова киселина може да се получи замърсяване от аерозоли, в тази област могат да се създадат условия за положително налягане, за да се избегне замърсяване с аерозол от съседни области. За да се избегне кръстосано замърсяване между пробите, след добавяне на нуклеиновата киселина, която ще бъде тествана, реакционната тръба, съдържаща реакционната смес, трябва да бъде покрита. За потенциално инфекциозни материали капакът трябва да бъде отворен в шкафа за биологична безопасност и трябва да има ясни процедури за обработка на проби и инактивиране.


Функцията на зоната на амплификация е: синтез на ДНК, амплификация и откриване на ДНК. За да се избегне замърсяване, причинено от аерозоли, ходенето в района трябва да бъде сведено до минимум. Трябва да се отбележи, че всички тествани реакционни епруветки не трябва да се отварят в тази област.


Функцията на областта за анализ на амплифицирания продукт е: допълнителен анализ и определяне на амплифицирани фрагменти, като хибридизация, електрофореза за разграждане на ензими, денатуриране на високоефективен течен анализ, секвениране и др. Продуктите за амплификация на нуклеиновата киселина имат различни методи за анализ, като например методи за хибридизация на сондата върху мембрани или върху микроплаки или чипове (радионуклидно етикетиране или нерадиоактивно нуклидно етикетиране), директен или усвоен електрофореза с агарозен гел, електрофореза с гел полиакриламид, Южен трансфер, методи за секвениране на нуклеинови киселини, масспектрометрия и др.


Зоната за анализ на амплифициращия продукт е основният източник на замърсяване на продукта за амплификация в PCR лабораторията, така че трябва да се внимава да не се изнася продуктът за амплификация през артикулите и работните дрехи в тази област. Когато се използва методът PCR-ELISA за откриване на усилени продукти, трябва да се използва чистачка за измиване на плочите, а отпадъчната течност трябва да се събира в 1 mol / L HCl и не може да се излива в лабораторията, но трябва да се изхвърли от лабораторията за PCR. Изпускайте. Използваният накрайник също трябва да се накисне в 1 mol / L HCl и след това да се постави в торба за боклук за изхвърляне съгласно процедурите, като например изгаряне. Тъй като тази област може да използва определени генетични мутации и токсични вещества като етидиев бромид, акриламид, формалдехид или радионуклиди и др., Трябва да се обърне внимание на защитата на безопасността на експериментаторите.